菌種保藏是微生物學(xué)工作者的重要研究手段之一,其目的是把菌株的原始性狀和優(yōu)良性狀保存下來,防止死亡、退化或雜菌污染。菌種保藏方法很多,現(xiàn)簡單介紹幾種:
1、低溫保藏法
固體斜面抱子,液體抱子,麩皮,大米,小米或玉米粉等材料制備的抱子等,都可用4左右低溫冰箱保存,時(shí)間在30~60天(根據(jù)菌種穩(wěn)定性而定),也可在棉塞上浸蠟,一般可達(dá)3~4個(gè)月,至半年之久。
2、低溫定期移植保存法
這是一種經(jīng)典的簡易保存法,即菌種接種于所要求的斜面培養(yǎng)基上,置最適溫度下培養(yǎng),至所需要的發(fā)育階段后,置于低溫,干燥處保存,每隔3~6個(gè)月移植培養(yǎng)一次(具體視菌種特性而定)。
除斜面定期移植外,還有穿刺培養(yǎng)定期移植法,對大腸桿菌,極毛芽抱桿菌效果良好,穿刺培養(yǎng)基瓊脂的含量比常用量少1/2(約0.6 %~0.8%)。
3、液體石蠟法
選用優(yōu)質(zhì)純凈的液體石蠟,經(jīng)121高壓滅菌2 h,然后170干熱處理1~2 h,以除水分,冷卻后加到斜面上,覆蓋以超過斜面為宜。菌種用的試管塞為橡皮塞,并用蠟封上,放陰涼室溫處即可。
4、砂土保藏法
(1)砂土載體準(zhǔn)備:將黃砂用自來水浸泡洗滌數(shù)次,使pH為中性,然后濾出烤干,用60目鋼絲篩除去粗粒備用,同時(shí)采用貧痔的深挖lm以下的土,自來水浸泡洗滌數(shù)次使pH中性,待沉淀后,棄去上清液,烤干后輾末,120目過篩,將上述砂和土以1:1混合,裝入1.2 cm X lO cm安培管中,裝量為試管1/7左右,塞好棉塞,120高壓滅菌1 h,間歇滅菌5~6次,烤干備用。
(2)菌種準(zhǔn)備:取生長良好、孢子豐富的新鮮斜面。需純菌,加滅菌蒸熘水2~2.5 ml,輕輕刮下孢子,吸0.2~0.3 ml到滅菌備用的沙土中,真空干燥4~6 h,低溫4保存。適用于產(chǎn)芽孢的細(xì)菌、放線菌和真菌、可保藏5~7年。
5、冷凍干燥法
這是菌種保藏比較理想的一種方法,適用千多種細(xì)菌和放線菌。在多數(shù)情況下,也適用于真菌、酵母、病毒、噬菌體、立克次氏體。它具有變異少,保藏時(shí)間長,輸送貯存方便之優(yōu)點(diǎn)。
6、液氮超低溫保藏法
(1)材料:液氮冰箱或液氮法。 優(yōu)質(zhì)玻璃瓶安瓿管(規(guī)格7.5mm X 10mm)液氮
(2)方法:將欲保藏的菌種懸液或菌塊(常用保護(hù)劑為10%甘油或5%~10%二甲基亞楓)密封于安瓿瓶內(nèi),先經(jīng)控制致冷速度,預(yù)凍后,貯藏于-l5O至-196液氮冰箱中保存,保存期間需注意及時(shí)補(bǔ)充液氮。需恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),取出安瓶管急速放35~40溫水中,使其迅速融化后,打開,移種。這是一種保藏菌種的好方法,國外已廣泛使用。